产品货号:
ALH207
中文名称:
植物直接PCR试剂盒
英文名称:
DirectFree Plant PCR Kit
产品规格:
100T|500T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒采用独特的裂解缓冲液快速裂解植物组织,释放的DNA无需纯化便可以作为模板,用高度耐抑制物的2×DirectFree PCR Mix扩增,扩增产物可直接上样电泳。
组分 | 100T | 500T |
Stock A | 0.5mL | 2.5mL |
Stock B | 1mL | 5mL |
Buffer N | 5mL | 25mL |
2×DirectFree PCR Mix | 1mL | 5mL |
ddH2O | 10mL | 50mL |
保存:2×DirectFree PCR Mix置于-20℃保存,避免反复冻融次数过多,3周内短时间使用可放4℃保存。其余常温或者4℃保存,有效期12个月。
- 如果扩增条带较弱,可以适当增加减少模板加入量,裂解混合物模板一般可以在0.5μL~2μL内调节,但是注意一般不能超过4μL,加入太多,反而抑制PCR反应。
- 本试剂盒适用于简单植物组织样本,如果样品多酚多糖较多,扩增效果不理想,可在20μL PCR反应体系加入2μL 10% PVP40改善效果。
- 如果非特异扩增较多,可调整退火温度,或者适当增减模板用量。
- 各溶液使用完毕后,应该立刻盖紧盖子,以免PH改变影响质量。
- 配制即用裂解液:按照5μL Stock A+ 10μL Stock B+ 85μL ddH2O = 100μL比例配制成即用裂解液。每个样品需要50μL即用裂解液,具体量可以根据样品数量按照比例放大配制即可。
- 取50μL裂解液于0.2mL PCR薄壁管中(没有PCR仪器者也可以用0.5mL离心管)。然后置测试材料叶片(一般20mm2左右,可剪成3/4条放入)与裂解液中(也可以用吸头戳几下帮助裂解),吹打或者涡旋混匀,确保叶片碎块浸没在裂解液内。
- 98℃裂解30min(建议PCR仪上操作),根据情况裂解时间可以在15分钟~1小时内调整。
- 取出离心管迅速放冰上,加入50μL Buffer N,混匀,即可直接用做PCR模板或置于4℃或-20℃保存。
- PCR扩增:
- 配制反应体系:
成分 用量 终浓度 裂解混合物模板 1μL as required 2×DirectFree PCR Mix 10μL 1× Forward Primer (10μM) 0.4μL 0.2μM each Reverse Primer (10μM) 0.4μL 0.2μM each ddH2O 至20μL - - PCR扩增程序:
温度 时间 循环数 95℃ 5~10min 1 94℃ 30sec 35~40 54~60℃ 30sec 72℃ 1kb/min 72℃ 5~10min 1
- 配制反应体系:
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